Saringan fluoresensi mangrupikeun komponén penting dina mikroskop fluoresensi. Sistem has ngagaduhan tilu saringan dasar: saringan éksitasi, saringan émisi sareng eunteung dichroic. Biasana dibungkus dina kubus supados gugusna diselapkeun babarengan kana mikroskop.
Kumaha saringan fluoresensi tiasa dianggo?
Filter éksitasi
Saringan éksitasi ngirimkeun cahaya tina panjang gelombang anu spesifik sareng ngahalangan panjang gelombang anu sanés. Éta bisa dipaké pikeun ngahasilkeun kelir béda ku tuning filter pikeun ngidinan ngan hiji warna ngaliwatan. Saringan éksitasi datangna dina dua jenis utama - saringan long pass jeung saringan band pass. Éksitasi biasana mangrupa saringan bandpass anu ngan ukur panjang gelombang anu diserep ku fluorophore, sahingga ngaminimalkeun éksitasi sumber fluoresensi sanés sareng ngahalangan cahaya éksitasi dina pita émisi fluoresensi. Ditémbongkeun saperti ku garis biru dina gambar, BP nyaeta 460-495, nu hartina ngan bisa ngaliwatan fluoresensi 460-495nm.
Éta disimpen dina jalur katerangan mikroskop fluoresensi sareng nyaring sadaya panjang gelombang sumber cahaya kecuali rentang éksitasi fluorophore. Transmisi minimum filter ngarahkeun kacaangan sareng kecemerlangan gambar. Pangiriman minimum 40% pikeun saringan éksitasi disarankeun supados transmisina idéal> 85%. Bandwidth tina saringan éksitasi kudu sagemblengna aya dina rentang éksitasi fluorophore sahingga panjang gelombang puseur (CWL) saringan sacaket mungkin ka puncak panjang gelombang éksitasi fluorophore nu. Dénsitas optik filter éksitasi (OD) ngarahkeunnana gelap gambar latar; OD mangrupikeun ukuran kumaha saringan meungpeuk panjang gelombang di luar jangkauan transmisi atanapi bandwidth. OD minimum 3.0 disarankeun tapi OD 6.0 atanapi langkung ageung idéal.
Saringan émisi
Saringan émisi ngalayanan tujuan ngamungkinkeun fluoresensi anu dipikahoyong tina sampel pikeun ngahontal detéktor. Aranjeunna ngahalangan panjang gelombang anu langkung pondok sareng gaduh transmisi anu luhur pikeun panjang gelombang anu langkung panjang. Jinis saringan ogé dikaitkeun sareng nomer, contona BA510IF dina gambar (filter panghalang interferensi), éta sebutan nujul kana panjang gelombang dina 50% tina pangiriman maksimalna.
Rekomendasi anu sami pikeun saringan éksitasi leres pikeun saringan émisi: transmisi minimum, bandwidth, OD, sareng CWL. Saringan émisi sareng CWL idéal, transmisi minimum, sareng kombinasi OD nyayogikeun gambar anu paling terang, kalayan pameungpeuk anu paling jero, sareng mastikeun deteksi sinyal émisi anu samar.
Eunteung Dichroic
Eunteung dichroic disimpen antara saringan éksitasi sareng saringan émisi dina sudut 45° sareng ngagambarkeun sinyal éksitasi nuju fluorophore bari ngirimkeun sinyal émisi ka arah detektor. saringan dichroic idéal tur splitters beam boga transisi seukeut antara cerminan maksimum sarta transmisi maksimum, kalawan > 95% cerminan pikeun rubakpita tina filter éksitasi sarta transmisi > 90% pikeun rubakpita tina filter émisi. Pilih filter kalayan panjang gelombang simpang (λ) tina fluorophore dina pikiran, pikeun ngaleutikan stray-cahaya sarta ngamaksimalkeun rasio signal-to-noise gambar fluoresensi.
Eunteung dichroic dina inohong ieu teh DM505, ngaranna jadi sabab 505 nanométer nyaéta panjang gelombang dina 50% tina transmisi maksimum pikeun eunteung ieu. Kurva transmisi pikeun eunteung ieu nembongkeun transmisi tinggi di luhur 505 nm, serelek lungkawing dina transmisi ka kénca 505 nanométer, sarta reflectivity maksimum ka kénca 505 nanometer tapi masih bisa mibanda sababaraha transmisi handap 505 nm.
Naon bédana antara saringan pass panjang sareng saringan band pass?
Saringan fluoresensi bisa dibagi jadi dua jenis: long pass (LP) jeung band pass (BP).
Saringan pass panjang ngirimkeun panjang gelombang anu panjang sareng ngahalangan anu langkung pondok. Panjang gelombang cut-on nyaéta nilai dina 50% tina transmisi puncak, sarta sakabeh panjang gelombang luhureun cut-on dikirimkeun ku saringan long pass. Aranjeunna sering dianggo dina kaca spion dichroic sareng saringan émisi. Saringan Longpass kedah dianggo nalika aplikasina peryogi koléksi émisi maksimal sareng nalika diskriminasi spéktral henteu dipikahoyong atanapi dipikabutuh, anu umumna kasus pikeun panyilidikan anu ngahasilkeun spésiés pemancar tunggal dina spésimén kalayan tingkat autofluoresensi latar anu kawilang rendah.
Saringan band pass ngan ukur ngirimkeun pita panjang gelombang anu tangtu, sareng meungpeuk anu sanés. Aranjeunna ngurangan crosstalk ku ngamungkinkeun ngan bagian neneng tina spéktrum émisi fluorophore dikirimkeun, ngurangan autofluorescence noise sahingga ngaronjatkeun rasio signal-to-noise dina sampel autofluorescence tukang luhur, nu long pass filter teu bisa nawiskeun.
Sabaraha jinis set filter fluoresensi BestScope tiasa nyayogikeun?
Sababaraha jinis saringan umum kalebet saringan biru, héjo, sareng ultraviolét. Ditémbongkeun saperti dina tabél.
| Saringan Set | Filter éksitasi | Eunteung Dichroic | Filter panghalang | Lampu LED Panjang Gelombang | Aplikasi |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: Métode antibodi fluoresensi · Oranyeu asam: DNA, RNA · Auramin: basil tuberkel ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: Métode antibodi fluoresensi · Propidium iodida: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Observasi fluoresensi otomatis · DAPI: pewarnaan DNA · Hoechest 332528, 33342: dipaké pikeun ngawarnaan Kromosom |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Katekolamin · 5-hidroksi triptamin · Tetrasiklin: Rorongkong, Gigi |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Ci5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Saringan set anu dipaké dina akuisisi fluoresensi dirancang sabudeureun panjang gelombang utama dipaké dina aplikasi fluoresensi, nu dumasar sabudeureun fluorophores panglobana dipaké. Ku sabab kitu, aranjeunna ogé dingaranan fluorophore aranjeunna dimaksudkeun pikeun Imaging, kayaning DAPI (biru), FITC (héjo) atawa TRITC (beureum) filter kubus.
| Saringan Set | Filter éksitasi | Eunteung Dichroic | Filter panghalang | Lampu LED Panjang Gelombang |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Beureum | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Kumaha anjeun milih saringan fluoresensi?
1. Prinsip milih saringan fluoresensi nyaéta ngantepkeun lampu fluoresensi / émisi ngalangkungan tungtung pencitraan sajauh mungkin, sareng lengkep meungpeuk lampu éksitasi dina waktos anu sami, ku kituna kéngingkeun rasio sinyal-to-noise anu paling luhur. Utamana pikeun aplikasi éksitasi multiphoton sareng total mikroskop cerminan internal, noise lemah ogé bakal ngabalukarkeun gangguan hébat kana éfék Imaging, jadi sarat pikeun rasio sinyal jeung noise leuwih luhur.
2. Nyaho spéktrum éksitasi sareng émisi fluorofor. Pikeun ngawangun set filter fluoresensi anu ngahasilkeun gambar kontras kualitas luhur sareng latar hideung, saringan éksitasi sareng émisi kedah ngahontal transmisi anu luhur kalayan ripple passband minimal dina daérah anu pakait sareng puncak éksitasi fluorophore atanapi émisi.
3. Mertimbangkeun durability saringan fluoresensi. Saringan ieu kedah kedap kana sumber cahaya anu kuat anu ngahasilkeun sinar ultraviolét (UV) anu tiasa nyababkeun "kaduruk", khususna saringan exciter sabab kakeunaan intensitas pinuh ku sumber katerangan.
Gambar Sampel Fluoresensi Béda
Sumber daya dikumpulkeun sareng diatur dina Internét, sareng ngan ukur dianggo pikeun diajar sareng komunikasi. Upami aya palanggaran, mangga ngahubungi kami pikeun ngahapus.
waktos pos: Dec-09-2022